Plasmide CRISPR d'Activation (h) JNK1: sc-400048-ACT

MAPK8 code la kinase MAP humaine c‑Jun N‑terminale 1 (JNK1), une kinase MAP activée par le stress qui phosphoryle des facteurs de transcription tels que c‑JUN et module des programmes géniques dépendants d’AP‑1. JNK1 intègre des signaux provenant des cytokines, du stress oxydatif, de l’irradiation UV et du stress du réticulum endoplasmique afin de réguler l’apoptose, l’autophagie, l’inflammation et le contrôle du cycle cellulaire via des interactions entre les voies MAPK et NF‑κB. Cette voie contribue à des décisions cellulaires qui influencent la transformation oncogénique, les processus neurodégénératifs et des phénotypes métaboliques et inflammatoires, ce qui fait de MAPK8 un nœud largement utilisé pour la dissection mécanistique des voies de signalisation. Une signalisation JNK1 dérégulée a été associée à des altérations de la signalisation immunitaire et des réseaux de réponse au stress dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilité dans les études de génomique fonctionnelle.

JNK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JNK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JNK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JNK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JNK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.