Plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD4 (h): sc-406639

Présentation

JMJD4 code une oxygénase dépendante du 2‑oxoglutarate contenant un domaine JmjC, impliquée dans des réactions d’hydroxylation post‑traductionnelles susceptibles d’influencer la stabilité et la fonction des protéines. L’activité de JMJD4 a été associée à la régulation de processus liés à la traduction via la modification de facteurs ribosomiques et de liaison à l’ARN, avec des effets en aval sur la protéostasie et les réponses cellulaires au stress. En reliant la chimie des oxygénases au contrôle de l’expression génique, JMJD4 est étudiée dans des voies impliquant la détection métabolique, la signalisation associée à l’hypoxie et le remodelage adaptatif de la machinerie de traduction. La dérégulation de ces processus est pertinente dans des états prolifératifs et adaptés au stress, ce qui fait de JMJD4 une cible utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des programmes connexes de contrôle transcriptionnel/traductionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène JMJD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du JMJD4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert JMJD4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JMJD4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en JMJD4 pour l'étude de la signalisation de JMJD4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de JMJD4 essentiels à la fonction de JMJD4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de JMJD4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JMJD4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JMJD4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus JMJD4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JMJD4 plasmide HDR (h) et le JMJD4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie JMJD4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles JMJD4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.