Plasmide CRISPR d'Activation (h) JMJD3: sc-401883-ACT

Le gène humain KDM6B code la déméthylase des lysines d’histones JMJD3, une enzyme dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate qui élimine les marques répressives H3K27me3 afin de favoriser des programmes transcriptionnels associés aux transitions de destinée cellulaire. JMJD3 s’intègre aux mécanismes de remodelage de la chromatine et aux réseaux de gènes régulés par Polycomb pour contrôler l’engagement de lignée, l’expression des gènes inflammatoires et la transcription induite par des stimuli. Par ces mécanismes épigénétiques, KDM6B contribue à la régulation de la différenciation, de la sénescence et des voies de signalisation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles du développement, de la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer et des états inflammatoires chroniques. Une perturbation de l’activité ou de l’expression de JMJD3 peut modifier les paysages des enhancers et des promoteurs, influençant des voies en aval telles que la transcription dépendante de NF‑κB ainsi que des programmes oncogéniques ou suppresseurs de tumeurs selon le contexte.

JMJD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDM6B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JMJD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDM6B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDM6B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JMJD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDM6B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JMJD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JMJD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de KDM6B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.