Plasmide CRISPR d'Activation (h) JMJD2C: sc-403282-ACT

KDM4C (JMJD2C) code une histone déméthylase contenant un domaine Jumonji C (JmjC) qui élimine principalement des marques de méthylation répressives telles que H3K9me3/me2, favorisant l’ouverture de la chromatine et la compétence transcriptionnelle. Grâce à la régulation dynamique de la méthylation des histones, JMJD2C influence le contrôle épigénétique de programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Une activité dérégulée de KDM4C a été associée à des états de chromatine aberrants observés dans de nombreux cancers, où une accessibilité modifiée des enhancers et des promoteurs peut renforcer des circuits transcriptionnels oncogéniques. En tant que régulateur nucléaire de la chromatine, JMJD2C est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la coopération avec des facteurs de transcription, le remodelage de la chromatine et le maintien de la plasticité épigénétique dans les cellules humaines.

JMJD2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDM4C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JMJD2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDM4C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDM4C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JMJD2C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDM4C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JMJD2C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JMJD2C dans les cellules tumorales présentant une expression de KDM4C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.