Plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD1A (h): sc-403423

Présentation

KDM3A code JMJD1A, une histone déméthylase contenant un domaine Jumonji C (JmjC) qui élimine principalement les marques répressives H3K9me1/2 afin de favoriser l’activation transcriptionnelle. En remodelant l’accessibilité de la chromatine, JMJD1A module des programmes liés à la signalisation des récepteurs hormonaux, aux réponses à l’hypoxie, à l’expression de gènes métaboliques et aux décisions de destin cellulaire. Son activité recoupe la régulation épigénétique des états des enhancers et des promoteurs, influençant des voies qui gouvernent la prolifération, la différenciation et l’adaptation au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de KDM3A/JMJD1A a été associée à des réseaux transcriptionnels altérés observés dans de multiples contextes cancéreux et phénotypes métaboliques, ce qui soutient l’étude de vulnérabilités épigénétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD1A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KDM3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KDM3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KDM3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JMJD1A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KDM3A pour l'étude de la signalisation de JMJD1A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KDM3A essentiels à la fonction de JMJD1A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KDM3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JMJD1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JMJD1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KDM3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JMJD1A plasmide HDR (h) et le JMJD1A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KDM3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KDM3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.