JIP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403514-ACT

MAPK8IP2 kodiert JIP-2, ein zytoplasmatisches Scaffold-Protein, das MAPK-Signalmodule organisiert – insbesondere den JNK‑Signalweg (MAPK8/9/10) –, indem es die Interaktionen zwischen upstream gelegenen Kinasen und downstream wirkenden Effektoren koordiniert. Durch die Ausprägung der räumlichen und zeitlichen Dynamik stressaktivierter Kinasekaskaden trägt JIP‑2 zur Regulation von Apoptose, Entzündungsreaktionen sowie neuronaler Differenzierung und Transportprozessen bei. Die Aktivität von MAPK8IP2 wird häufig im Kontext von Cross‑Talk in der Signaltransduktion untersucht, der synaptische Funktionen und die zelluläre Stressresilienz beeinflusst. Eine Fehlregulation JNK‑zentrierter Signaling-Netzwerke unter Beteiligung von JIP‑2 wurde mit Mechanismen in der Neurobiologie und neurodegenerationsrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht, ebenso wie mit breiteren Kontexten der Stresssignalgebung, die in zahlreichen Krankheitsmodellen eine Rolle spielen.

JIP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPK8IP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

JIP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPK8IP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPK8IP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen JIP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPK8IP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von JIP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des JIP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPK8IP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.