Plásmido Doble Nickase (h) JAK2: sc-400246-NIC

El JAK2 humano codifica una tirosina quinasa no receptora que acopla los receptores de citocinas y factores de crecimiento a la señalización intracelular, de forma destacada a través de la vía JAK–STAT. Tras la activación del receptor, JAK2 media cascadas de fosforilación que influyen en programas transcripcionales que regulan la hematopoyesis, la diferenciación de células inmunitarias y las respuestas inflamatorias, con crosstalk adicional con las vías PI3K–AKT y MAPK. La actividad o expresión desregulada de JAK2 se ha vinculado con una sensibilidad alterada a citocinas y con señalización proliferativa aberrante en la biología de enfermedades hematológicas e inflamatorias. Como nodo central en la señalización proximal al receptor, JAK2 se estudia ampliamente por su papel en el compromiso de linaje, la señalización de estrés y el control transcripcional aguas abajo de los receptores de citocinas.

JAK2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus JAK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de JAK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de JAK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con JAK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.