Plasmide CRISPR/Cas9 KO Jagged1 (m): sc-421197

Présentation

Jag1 code le ligand membranaire Jagged1, un activateur canonique des récepteurs Notch qui régule une signalisation juxtacrine contrôlant les décisions de destin cellulaire, la formation de frontières et la mise en place des patrons tissulaires chez la souris. L’interaction Jagged1–Notch déclenche la libération protéolytique du domaine intracellulaire de Notch et une reprogrammation transcriptionnelle via les complexes RBPJ/CSL, modulant des processus tels que l’angiogenèse, le maintien des cellules souches et progénitrices, ainsi que les interactions épithélio-mésenchymateuses. Dans des modèles de développement et de maladie, une altération de la signalisation Jag1/Notch est associée à une différenciation dérégulée, à un remodelage vasculaire aberrant et à des modifications du comportement des cellules immunitaires et stromales. Comme la sortie de signal Notch dépend fortement du contexte, la perte de fonction de Jag1 constitue un moyen direct d’analyser in vivo et en culture des seuils de signalisation spécifiques au ligand ainsi que les interactions entre voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Jagged1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Jag1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Jag1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Jag1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Jagged1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Jag1 pour l'étude de la signalisation de Jagged1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Jag1 essentiels à la fonction de Jagged1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Jag1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Jagged1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Jagged1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Jag1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Jagged1 plasmide HDR (m) et le Jagged1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Jag1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Jag1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.