Plasmide CRISPR d'Activation (h) Jade-1: sc-410620-ACT

JADE1 code pour Jade-1, une protéine nucléaire à doigt de zinc de type PHD qui agit comme régulateur épigénétique en reconnaissant des marques d’histones et en s’associant à des complexes d’histone acétyltransférases afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et la transcription. Par ces interactions, Jade-1 influence des programmes liés au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à l’expression de gènes associés à la différenciation. JADE1 a également été étudié en lien avec la régulation, dépendante de l’ubiquitine, de protéines de signalisation et de facteurs de transcription, reliant ainsi le remodelage de la chromatine à la protéostasie. Une expression altérée de JADE1 ou une dérégulation des voies de chromatine associées à Jade-1 a été impliquée dans des contextes de prolifération aberrante et de reprogrammation transcriptionnelle associée aux tumeurs, ce qui soutient son intérêt comme nœud mécanistique pour des recherches axées sur des voies.

Jade-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JADE1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Jade-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JADE1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JADE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Jade-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JADE1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Jade-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Jade-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de JADE1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.