Jade-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410620-ACT

JADE1は、核内PHD型ジンクフィンガータンパク質であるJade-1をコードしており、ヒストン修飾（ヒストンマーク）を認識し、さらにヒストンアセチル化酵素複合体と協働することで、クロマチンのアクセス性と転写を調節するエピジェネティック制御因子として機能します。これらの相互作用を通じて、Jade-1は細胞周期制御、DNA損傷応答、分化に関連した遺伝子発現といったプログラムに影響を及ぼします。JADE1はまた、ユビキチン依存的なシグナル伝達タンパク質や転写因子の制御との関連でも研究されており、クロマチンリモデリングとプロテオスタシスを結び付ける役割が示唆されています。JADE1の発現変化、あるいはJade-1関連クロマチン経路の調節異常は、異常増殖や腫瘍に伴う転写プログラムの再編成といった状況に関与すると考えられており、経路に焦点を当てた研究のための機序的ハブとしての有用性を支持します。

Jade-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JADE1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Jade-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JADE1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJADE1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Jade-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJADE1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJade-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJADE1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJade-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。