Plasmide Double Nickase (m) JAB1: sc-424107-NIC

La protéine Cops5 de la souris code JAB1 (CSN5), la sous-unité métalloprotéase du signalosome COP9 qui catalyse la déneddylation des cullines afin de réguler l’activité des ligases E3 ubiquitine de type cullin-RING et la protéostasie. Par ce biais, JAB1 coordonne la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les sorties de transduction des signaux en contrôlant le renouvellement et la localisation de protéines régulatrices clés, notamment des modulateurs des programmes transcriptionnels AP-1. JAB1 interagit aussi avec des voies impliquées dans l’apoptose, les réponses au stress et la signalisation inflammatoire, reliant la régulation dépendante de l’ubiquitine à un contrôle transcriptionnel spécifique du contexte. Une dérégulation de la fonction CSN5/COP9 a été associée à une prolifération aberrante et à des états de signalisation altérés dans plusieurs modèles pertinents pour la maladie, ce qui fait de Cops5 une cible fréquente d’études mécanistiques sur le contrôle de la voie ubiquitine–protéasome.

JAB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cops5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cops5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cops5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cops5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.