Plasmide Double Nickase (h) ITM1: sc-405155-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ITM1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ITM1 Double Nickase (h) et le plasmide ITM1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant STT3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ITM1 Antibody (A-2): sc-390227
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ITM1 | sc-405155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ITM1 | sc-405155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **STT3A** code la sous-unité catalytique du complexe **oligosaccharyltransférase (OST)**, responsable de la **N‑glycosylation co‑traductionnelle** des polypeptides naissants dans le réticulum endoplasmique. En transférant des glycannes préassemblés sur des résidus **Asn** au sein du **motif consensus (séquon)**, STT3A contribue au repliement des protéines, au contrôle qualité et au trafic intracellulaire, et influence l’homéostasie du RE ainsi que la réponse aux protéines mal repliées (**UPR**). Une perturbation de la glycosylation dépendante de STT3A peut remodeler la maturation et la signalisation des récepteurs, modifier la protéostasie à la surface cellulaire et affecter la capacité de la voie de sécrétion. La **N‑glycosylation** dérégulée et les voies de **stress du RE** sont impliquées dans divers contextes pathologiques, notamment les troubles congénitaux de la glycosylation et l’adaptation de la protéostasie associée aux cancers, faisant de STT3A une cible utile pour des études mécanistiques.
ITM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STT3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STT3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STT3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STT3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.