Plasmide Double Nickase (h) ITI-H5: sc-408967-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ITI-H5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ITI-H5 Double Nickase (h) et le plasmide ITI-H5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ITIH5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ITI-H5 Antibody (D-1): sc-390885
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ITI-H5 | sc-408967-NIC | 20 µg | $410.00 |
L’inhibiteur inter‑alpha‑trypsine, chaîne lourde 5 (ITIH5), est une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, qui contribue à la stabilisation de l’hyaluronane et à l’organisation matricielle grâce au transfert covalent de chaînes lourdes vers l’hyaluronane, influençant l’hydratation des tissus et leurs propriétés biomécaniques. Dans les cellules humaines, l’activité d’ITIH5 recoupe des voies qui régulent l’adhésion cellule–matrice, l’intégrité épithéliale et le remodelage stromal, affectant des processus tels que la migration et l’invasion. Une expression altérée d’ITIH5 a été associée à la biologie tumorale et au potentiel métastatique dans de multiples contextes tissulaires, en cohérence avec des rôles dans l’homéostasie de la matrice extracellulaire et les programmes de motilité cellulaire. Ces caractéristiques font d’ITIH5 une cible utile pour analyser comment les matrices riches en hyaluronane façonnent les signaux et le comportement cellulaire.
ITI-H5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITIH5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITIH5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITIH5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITIH5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.