Plasmide CRISPR/Cas9 KO ITI-H4 (h): sc-403358

Présentation

ITIH4 code la chaîne lourde H4 de l’inhibiteur inter-α-trypsine (ITI‑H4), une glycoprotéine sécrétée enrichie dans le foie, associée à la famille des inter‑α‑inhibiteurs, et qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire ainsi qu’à la modulation de l’activité des protéases dans la circulation. ITI‑H4 est liée à la biologie de l’inflammation et de la réponse de phase aiguë, avec une régulation influencée par des voies dépendantes des cytokines qui remodèlent la composition des protéines plasmatiques lors de lésions tissulaires et de réponses immunitaires. Des altérations de l’expression et du processing d’ITIH4 ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment des troubles inflammatoires et des signatures protéomiques associées au cancer, ce qui étaye son utilisation comme cible de recherche mécanistique et proche des biomarqueurs. En tant que facteur soluble influençant le milieu extracellulaire et les interactions cellule–matrice, ITIH4 est pertinent pour l’étude des voies qui gouvernent l’inflammation, le remodelage tissulaire et la régulation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ITI-H4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITIH4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITIH4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITIH4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ITI-H4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITIH4 pour l'étude de la signalisation de ITI-H4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ITIH4 essentiels à la fonction de ITI-H4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITIH4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ITI-H4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ITI-H4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITIH4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ITI-H4 plasmide HDR (h) et le ITI-H4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITIH4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITIH4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.