Plasmide CRISPR/Cas9 KO ITF-2 (h): sc-402815

Présentation

TCF4 code le facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) ITF-2 (également appelé E2-2), un régulateur se liant à l’ADN qui module des programmes d’expression génique spécifiques de lignée via la reconnaissance des motifs E-box et la dimérisation avec d’autres protéines bHLH. ITF-2 participe à des réseaux transcriptionnels qui gouvernent la différenciation cellulaire, la prolifération et l’organisation du développement, et il s’articule avec des voies qui orientent les décisions de destin cellulaire et la régulation des gènes dépendante de la chromatine. Une activité dérégulée de TCF4 a été associée à la neurobiologie du développement et à la spécification des cellules immunitaires, et un contrôle transcriptionnel altéré par ITF-2 est lié à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment des troubles du développement et un remodelage transcriptionnel associé aux cancers. En tant que régulateur dépendant du contexte, TCF4 est fréquemment étudié pour son rôle dans le contrôle de la dynamique de l’expression génique, de l’activité des enhancers et des sorties des voies en aval dans divers modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ITF-2/TCF4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TCF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TCF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TCF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ITF-2/TCF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TCF4 pour l'étude de la signalisation de ITF-2/TCF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TCF4 essentiels à la fonction de ITF-2/TCF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TCF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ITF-2/TCF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ITF-2/TCF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TCF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ITF-2/TCF4 plasmide HDR (h) et le ITF-2/TCF4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TCF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TCF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.