ITF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402815

Panoramica

TCF4 codifica il fattore di trascrizione di tipo basic helix-loop-helix ITF-2 (noto anche come E2-2), un regolatore che si lega al DNA e modula programmi di espressione genica specifici di linea attraverso il riconoscimento dei motivi E-box e la dimerizzazione con altre proteine bHLH. ITF-2 partecipa a reti trascrizionali che governano la differenziazione cellulare, la proliferazione e la definizione dei pattern di sviluppo, e interagisce con vie che influenzano le decisioni di destino cellulare e la regolazione genica dipendente dalla cromatina. Un’attività deregolata di TCF4 è stata collegata alla biologia del neurosviluppo e alla specificazione delle cellule immunitarie, e un controllo trascrizionale alterato da parte di ITF-2 è associato a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi disturbi dello sviluppo e riprogrammazione trascrizionale legata alle neoplasie. In quanto regolatore dipendente dal contesto, TCF4 è spesso studiato per il suo ruolo nel controllare la dinamica dell’espressione genica, l’attività degli enhancer e gli output delle vie a valle in diversi modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ITF-2/TCF4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TCF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TCF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TCF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ITF-2/TCF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TCF4 per lo studio della segnalazione di ITF-2/TCF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TCF4 critici per la funzione di ITF-2/TCF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TCF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TCF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ITF-2/TCF4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ITF-2/TCF4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TCF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TCF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.