Plásmido CRISPR de Activación (h) Islet-1: sc-401733-ACT

El ISL1 humano codifica Islet-1, un factor de transcripción homeobox con dominio LIM que actúa como regulador especificador de linaje durante el desarrollo embrionario. ISL1 se integra con programas transcripcionales centrales y redes de regulación de la cromatina para controlar la expresión génica en progenitores endocrinos pancreáticos, neuronas motoras y derivados del segundo campo cardíaco, influyendo en la diferenciación, la migración y la maduración. Mediante la coordinación con vías que gobiernan la organogénesis y las decisiones de destino celular, ISL1 ayuda a definir la identidad endocrina y los programas neurogénicos de manera dependiente del contexto. La expresión desregulada de ISL1 o la alteración de los circuitos downstream se han asociado con anomalías del desarrollo y se utiliza con frecuencia como marcador molecular y como nodo mecanístico en estudios de la biología de las células beta relacionada con la diabetes, la cardiogénesis y los procesos del neurodesarrollo.

Islet-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ISL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Islet-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ISL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ISL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Islet-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ISL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Islet-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Islet-1 en células tumorales con expresión de ISL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.