Plasmide CRISPR/Cas9 KO ISGF-3γ p48 (m): sc-421156

Présentation

Irf9 code ISGF-3γ p48 (également connu sous le nom d’IRF9), un composant de liaison à l’ADN du complexe « interferon-stimulated gene factor 3 » (ISGF3), qui s’associe à STAT1 et STAT2 pour activer la transcription des gènes stimulés par l’interféron. Dans les cellules de souris, IRF9 est au cœur de la signalisation des interférons de type I et de type III, reliant l’activation de JAK–STAT aux programmes de restriction antivirale, à la présentation de l’antigène et, plus largement, à la régulation de l’immunité innée. En modulant les réseaux de gènes ISG, IRF9 influence le niveau basal d’inflammation, la réactivité aux cytokines et la communication entre cellules immunitaires au sein des tissus. Une activité IRF9/ISGF3 dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de sensibilité aux virus, de signatures interféron associées à l’auto-immunité et de pathologies liées à l’inflammation, pertinentes pour des modèles de cancer et de maladies métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ISGF-3γ p48 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Irf9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Irf9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Irf9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ISGF-3γ p48.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Irf9 pour l'étude de la signalisation de ISGF-3γ p48, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Irf9 essentiels à la fonction de ISGF-3γ p48
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Irf9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ISGF-3γ p48 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ISGF-3γ p48 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Irf9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ISGF-3γ p48 plasmide HDR (m) et le ISGF-3γ p48 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Irf9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Irf9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.