Plasmide Double Nickase (m) ISCA1: sc-427272-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ISCA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ISCA1 Double Nickase (m) et le plasmide ISCA1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Isca1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ISCA1 | sc-427272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ISCA1 | sc-427272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine murine ISCA1 (Isca1) code une protéine mitochondriale de type A impliquée dans la maturation des clusters fer–soufre (Fe–S), en soutenant la biogenèse des cofacteurs [4Fe–4S] requis par des composants de la chaîne respiratoire et de nombreuses enzymes métaboliques. Par son rôle dans les étapes tardives de l’assemblage des clusters Fe–S, ISCA1 contribue à la phosphorylation oxydative, à l’homéostasie redox et au maintien de la fonction mitochondriale dans des conditions cellulaires de fer variables. La perturbation des voies des clusters Fe–S peut déstabiliser le maintien du génome mitochondrial et le transport d’électrons, reliant les dysfonctionnements associés à ISCA1 à des phénotypes de stress bioénergétique pertinents pour des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuromusculaires. Ainsi, Isca1 est fréquemment étudié dans le contexte du métabolisme mitochondrial, de la signalisation du stress et des réseaux d’enzymes dépendantes des clusters Fe–S.
ISCA1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Isca1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Isca1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Isca1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Isca1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.