Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRS-4: sc-402033-ACT

Le gène humain **IRS4** code le **substrat du récepteur de l’insuline 4 (IRS‑4)**, un adaptateur cytoplasmique qui est phosphorylé sur des résidus tyrosine en aval des récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1, afin de coupler l’activation du récepteur aux voies de signalisation **PI3K–AKT–mTOR** et **RAS–MAPK**. En servant de plateforme d’ancrage pour des protéines à domaine SH2, telles que les sous-unités régulatrices de la PI3K et des facteurs associés à GRB2, IRS‑4 influence les programmes du métabolisme du glucose et des lipides, la croissance cellulaire et les choix de survie cellulaire. L’expression d’IRS4 et le remaniement de sa signalisation ont été associés à une dépendance modifiée aux facteurs de croissance et à des phénotypes prolifératifs dans des contextes liés au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les interactions entre voies et la régulation par rétroaction au sein des réseaux de récepteurs à activité tyrosine kinase.

IRS-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRS-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRS-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRS-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRS-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.