Plasmide Double Nickase (m) IRP-2: sc-425717-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IRP-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IRP-2 Double Nickase (m) et le plasmide IRP-2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ireb2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IRP-2 Antibody (4G11): sc-33680
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) IRP-2 | sc-425717-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Ireb2* code la protéine régulatrice du fer 2 (IRP-2), un facteur de liaison à l’ARN qui contrôle l’homéostasie du fer au niveau post‑transcriptionnel en reconnaissant des éléments de réponse au fer dans des ARNm cibles tels que ceux du récepteur de la transferrine 1 et de la ferritine. Grâce à une régulation de la stabilité d’IRP‑2 dépendante du fer et de l’oxygène, *Ireb2* intègre la disponibilité cellulaire en fer aux voies qui gouvernent le métabolisme mitochondrial, l’équilibre redox et la biogenèse de l’hème et des centres fer‑soufre. Une perturbation de l’activité d’IRP‑2 peut modifier les pools de fer labile et les réponses au stress oxydant, reliant une dysrégulation de l’homéostasie du fer à la neurodégénérescence, à des phénotypes liés à l’anémie et à la signalisation inflammatoire dans de multiples tissus. Ces propriétés font de *Ireb2* un locus utile pour des études mécanistiques sur la régulation génique dépendante du fer, la sensibilité à la ferroptose et l’adaptation métabolique dans des modèles murins et des cellules en culture.
IRP-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ireb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ireb2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ireb2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ireb2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.