Plasmide Double Nickase (h) IRP-2: sc-401710-NIC

L’IREB2 humain code la protéine régulatrice du fer 2 (IRP‑2), un facteur cytosolique liant l’ARN qui contrôle le métabolisme du fer au niveau post‑transcriptionnel en reconnaissant des éléments de réponse au fer dans les ARNm cibles. IRP‑2 module la stabilité et la traduction de transcrits clés impliqués dans la gestion du fer, notamment le récepteur de la transferrine (TFRC) et les sous‑unités de la ferritine (FTH1/FTL), coordonnant ainsi l’absorption, le stockage et l’utilisation du fer. Son activité est étroitement liée à la disponibilité intracellulaire en fer et à l’état redox, en interaction avec la fonction mitochondriale, la biosynthèse de l’hème et les voies du stress oxydant. Une signalisation IREB2/IRP‑2 dérégulée a été impliquée dans la dyshoméostasie du fer observée dans la neurodégénérescence, des phénotypes liés à l’anémie et des réponses au stress pertinentes pour la ferroptose, ce qui en fait un nœud utile pour les études mécanistiques de l’homéostasie des métaux.

IRP-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IREB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IREB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IREB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IREB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.