Plasmide Double Nickase (h) IRF3: sc-417171-NIC

Le facteur régulateur de l’interféron 3 (IRF3) est un facteur de transcription exprimé de façon ubiquitaire qui coordonne les réponses immunitaires innées précoces à la détection des virus et des acides nucléiques cytosoliques. Lorsqu’il est activé en aval des voies des récepteurs de reconnaissance de motifs, notamment cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS et TLR3–TRIF, IRF3 est phosphorylé par TBK1/IKKε, dimérise et se transloque dans le noyau afin d’induire les interférons de type I et les gènes stimulés par l’interféron. Par ce programme, IRF3 façonne la restriction antivirale, les interactions de signalisation inflammatoire avec NF-κB et les réponses au stress cellulaire telles que l’apoptose. Une activité d’IRF3 dérégulée a été impliquée dans une signalisation de l’interféron aberrante observée dans la biologie des infections, des phénotypes auto-inflammatoires et les interactions tumeur–immunité, ce qui en fait un nœud central pour les études mécanistiques de l’immunité innée.

IRF3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IRF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IRF3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IRF3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IRF3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.