Plasmide Double Nickase (h) IRF-5: sc-400920-NIC

Le facteur régulateur de l’interféron 5 (IRF5) est un facteur de transcription qui intègre la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs afin de façonner les réponses immunitaires innée et adaptative. En aval des voies des récepteurs Toll-like et des récepteurs de type RIG-I, IRF-5 favorise des programmes transcriptionnels liés aux réponses à l’interféron de type I et à la production de cytokines pro-inflammatoires, influençant la polarisation des macrophages et l’activité des cellules B. L’activité d’IRF5 recoupe les voies de signalisation NF-κB et MAPK et contribue à un contrôle dépendant du contexte de l’apoptose et des décisions de destin cellulaire. Des variations génétiques et d’expression d’IRF5 ont été associées à une dérégulation immunitaire et à une susceptibilité à des phénotypes de maladies auto-immunes et inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques en immunologie.

IRF-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IRF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IRF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IRF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IRF5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.