Plasmide Double Nickase (h) IRF-4: sc-400288-NIC

IRF4 code le facteur régulateur de l'interféron 4 (IRF-4), un facteur de transcription restreint à la lignée lymphoïde qui intègre des signaux issus des récepteurs de l'antigène, des cytokines et de l'immunité innée afin de contrôler des programmes géniques dans les lymphocytes B, les lymphocytes T et lors de la différenciation en plasmocytes. IRF-4 agit de concert avec des partenaires tels que PU.1/SPI1, BATF et NF-κB pour moduler l'accessibilité de la chromatine et les sorties transcriptionnelles, influençant l'activation, la recombinaison de commutation de classe (class-switch) et les décisions de destin effecteur. Il module des réseaux de signalisation et de transcription en aval de voies comprenant la signalisation TCR/BCR, les réponses associées à l'interféron et des états d'activation liés aux récepteurs Toll-like. Une expression ou une activité dérégulée d'IRF4 est impliquée dans des dysfonctionnements à médiation immunitaire et est fréquemment étudiée dans la biologie des hémopathies malignes, où l'identité de lignée et les programmes de survie sont perturbés.

IRF-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IRF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IRF4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IRF4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IRF4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.