Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRF-2: sc-402135-ACT

Le facteur régulateur de l’interféron 2 (IRF2) code IRF‑2, un facteur de transcription se liant à l’ADN qui module la signalisation de l’interféron de type I ainsi que des programmes géniques plus larges de l’immunité innée. IRF‑2 entre en compétition avec des membres apparentés de la famille IRF sur des éléments de réponse stimulés par l’interféron, afin d’ajuster la transcription induite par les cytokines, façonnant ainsi les réponses antivirales, le tonus inflammatoire et les décisions liées à l’état cellulaire. Par ces activités, IRF‑2 influence des voies contrôlant la présentation de l’antigène, l’apoptose et des réseaux transcriptionnels liés au cycle cellulaire. Une expression ou une activité dérégulée d’IRF2 a été associée à des dysfonctionnements immunitaires et à des phénotypes transcriptionnels pertinents pour le cancer, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans les études d’immunologie et de signalisation oncogénique.

IRF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRF-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRF-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRF-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.