Plásmido CRISPR de Activación (h) IRAK-4: sc-416405-ACT

La quinasa 4 asociada al receptor de interleucina 1 (IRAK4) codifica IRAK-4, una quinasa de serina/treonina que funciona como un nodo proximal de señalización aguas abajo de los receptores tipo Toll dependientes de MyD88 y de los miembros de la familia del receptor de IL-1. Tras la activación del receptor, IRAK-4 ayuda a ensamblar el myddosoma y propaga la señal hacia TRAF6 y TAK1, impulsando la activación de las vías de NF-κB y MAPK y configurando programas transcripcionales de citocinas y quimiocinas. Esta vía es central para el reconocimiento inmunitario innato, las respuestas asociadas al inflamasoma y la comunicación cruzada con redes de señalización de interferón. La actividad o expresión desregulada de IRAK4 se ha vinculado con señalización inflamatoria aberrante y patología mediada por el sistema inmunitario, y la alteración del resultado de la vía se estudia en contextos de biología de infecciones, autoinmunidad y neoplasias hematológicas.

IRAK-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IRAK4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRAK-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IRAK4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IRAK4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRAK-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IRAK4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRAK-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRAK-4 en células tumorales con expresión de IRAK4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.