Plasmide Double Nickase (h) IP3R-III: sc-402138-NIC

L’ITPR3 humain code IP3R-III, un canal de libération du Ca²⁺ situé dans la membrane du réticulum endoplasmique, activé par l’inositol 1,4,5-trisphosphate généré en aval de la signalisation de la phospholipase C. En modulant la dynamique du Ca²⁺ cytosolique et organellaire, IP3R-III régule le couplage excitation–sécrétion, la bioénergétique mitochondriale, les réponses au stress du RE et l’apoptose via le transfert de Ca²⁺ au niveau des sites de contact RE–mitochondries. Le flux calcique dépendant d’ITPR3 intègre les signaux issus des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase aux programmes transcriptionnels et à l’adaptation métabolique, influençant les décisions de destinée cellulaire. Une expression ou une signalisation dérégulée d’IP3R-III a été associée à une homéostasie calcique altérée dans des contextes de biologie du cancer, de physiologie épithéliale et de signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de voies de signalisation.

IP3R-III Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITPR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITPR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITPR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITPR3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.