IP Receptor Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404135

Descripción general

PTGIR codifica el receptor humano de la prostaciclina (IP), un receptor acoplado a proteína G que se une a la prostaciclina (PGI2) para regular la señalización de AMPc y los programas transcripcionales posteriores dependientes de PKA. La activación del receptor IP modula el tono vascular, la respuesta plaquetaria y el comportamiento de las células del músculo liso, integrando la biosíntesis de eicosanoides con las vías de segundos mensajeros de los GPCR. La señalización de PTGIR también se conecta con circuitos inflamatorios y con la homeostasis endotelial mediante la regulación de la producción de citocinas y de la función de barrera. Las alteraciones en la actividad del eje prostaciclina–receptor IP se han asociado con fenotipos de disfunción cardiopulmonar y vascular, lo que respalda su relevancia en estudios de trombosis, biología vascular pulmonar y mecanismos de enfermedad inflamatoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IP Receptor (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTGIR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTGIR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTGIR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IP Receptor.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTGIR para la investigación de la señalización de IP Receptor, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PTGIR críticos para la función de IP Receptor
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTGIR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IP Receptor CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido IP Receptor CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTGIR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IP Receptor (h) y el plásmido HDR IP Receptor (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTGIR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTGIR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.