Plasmide CRISPR d'Activation (m) IP-10: sc-421031-ACT

Le gène murin *Cxcl10* code la protéine 10 induite par l’interféron gamma (IP-10/CXCL10), une chimiokine de la famille CXC qui transmet ses signaux principalement via CXCR3 afin de réguler la chimiotaxie et le positionnement des lymphocytes T activés, des cellules NK et d’autres sous-populations de leucocytes. Son expression est fortement induite en aval de l’IFN-γ et des voies des récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR), intégrant des programmes inflammatoires liés à JAK/STAT et à NF-κB qui façonnent la surveillance immunitaire des tissus. IP-10 contribue à coordonner le trafic leucocytaire, l’activation endothéliale et l’amplification des réseaux de cytokines lors des infections et des inflammations stériles. Une signalisation CXCL10 dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles d’auto-immunité, de neuroinflammation et d’interactions tumeur–système immunitaire, où une modification du recrutement des cellules immunitaires contribue à la pathologie.

IP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cxcl10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IP-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cxcl10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cxcl10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IP-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cxcl10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IP-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IP-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cxcl10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.