Plasmide Double Nickase (h) involucrin: sc-416724-NIC

IVL code l’involucrine, un marqueur de différenciation des kératinocytes qui est réticulé dans l’enveloppe cornée par des transglutaminases afin de renforcer la barrière épidermique. L’involucrine participe aux programmes de différenciation terminale, coordonnés avec le remodelage des filaments intermédiaires de kératine et une signalisation dépendante du calcium qui soutient la cornification. Une expression altérée d’IVL et des anomalies d’assemblage de l’enveloppe ont été associées à une homéostasie épidermique dérégulée dans des affections cutanées inflammatoires et hyperprolifératives, notamment le psoriasis et la dermatite atopique, et sont fréquemment étudiées dans le contexte de défauts de barrière. Par conséquent, IVL est largement utilisée pour étudier la maturation de l’épithélium stratifié, la formation de la barrière et les réseaux transcriptionnels qui gouvernent le destin des kératinocytes.

involucrin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IVL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IVL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IVL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IVL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.