Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αX/ITGAX/CD11c: sc-401765-ACT

ITGAX code l’intégrine αX (CD11c), une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β2 (CD18) pour former le récepteur du complément 4 (CR4), un récepteur majeur d’adhésion et de phagocytose exprimé par les cellules de la lignée myéloïde. CD11c médie les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, le trafic des leucocytes et la reconnaissance, dépendante du complément, de cibles opsonisées par iC3b, en intégrant des signaux d’activation « inside-out » des intégrines pour réguler le remodelage du cytosquelette et la formation de la synapse immunologique. Par un dialogue coordonné avec la signalisation des récepteurs Fc et les réseaux de kinases en aval, ITGAX influence la capture d’antigènes, la maturation des cellules dendritiques et les programmes de cytokines inflammatoires. Une expression dérégulée d’ITGAX ou une abondance accrue de cellules CD11c+ est fréquemment utilisée pour stratifier l’infiltration immunitaire et les états d’activation myéloïde dans le cancer, l’inflammation auto-immune et les infections chroniques, soutenant des études mécanistiques de la biologie des maladies pilotées par les cellules myéloïdes.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGAX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGAX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGAX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αX/ITGAX/CD11c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGAX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αX/ITGAX/CD11c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αX/ITGAX/CD11c dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGAX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.