Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αV/ITGAV/CD51: sc-400506-ACT

ITGAV code l’intégrine αV (CD51), une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec plusieurs partenaires β (p. ex. β3, β5, β6, β8) pour former des récepteurs de ligands de la matrice extracellulaire contenant des motifs RGD, tels que la vitronectine, la fibronectine et l’ostéopontine. Par la liaison aux ligands et le regroupement des intégrines, les intégrines contenant αV coordonnent l’assemblage des adhésions focales et la mécanotransduction, activant la signalisation FAK/SRC et, en aval, les voies PI3K–AKT et MAPK qui régulent l’adhérence, la migration, la survie et le remodelage du cytosquelette. ITGAV s’inscrit également dans la biologie du TGF-β via l’activation du TGF-β latent médiée par αVβ6/αVβ8, reliant la perception de la matrice à des programmes inflammatoires et fibreux. Une activité dérégulée d’ITGAV a été associée à des comportements cellulaires invasifs, à des réponses angiogéniques et à des phénotypes de remodelage pertinents pour la progression du cancer, la fibrose et les interactions avec le microenvironnement immunitaire.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGAV sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGAV dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGAV, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αV/ITGAV/CD51. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGAV natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αV/ITGAV/CD51 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αV/ITGAV/CD51 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGAV silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.