Plasmide Double Nickase (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-NIC

L'ITGAM humain code l'intégrine αM (CD11b), qui s'hétérodimérise avec ITGB2 pour former Mac‑1/CR3, un récepteur d'adhésion leucocytaire et du complément, central pour les fonctions de l'immunité innée. CD11b assure une adhérence ferme et la migration transendothéliale via des interactions avec les ICAM, favorise la phagocytose de cibles opsonisées par iC3b et contribue à une signalisation « outside‑in » qui module le remodelage de l'actine et les programmes d'expression génique inflammatoires. Ces activités s'articulent avec la signalisation des intégrines, le dialogue avec les récepteurs Fc et le trafic guidé par les chimiokines dans des cellules myéloïdes telles que les neutrophiles, les monocytes, les macrophages et certains sous‑types de cellules dendritiques. Une adhérence et une signalisation effectrice dépendantes de CD11b, lorsqu'elles sont dérégulées, sont fréquemment étudiées dans l'inflammation et l'auto‑immunité, la pathogenèse des maladies infectieuses et le comportement des cellules myéloïdes dans les microenvironnements immunitaires associés aux tumeurs.

Integrin αM/CD11b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGAM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGAM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGAM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGAM.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.