Plasmide Double Nickase (h) Integrin αL/ITGAL/CD11a: sc-402246-NIC

ITGAL code l’intégrine αL (CD11a), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β2 (CD18) pour former LFA-1, un récepteur d’adhérence des leucocytes essentiel au trafic des cellules immunitaires et aux interactions cellule–cellule. La liaison de LFA-1 aux ligands de la famille ICAM régule l’adhérence ferme, la migration transendothéliale et la formation de la synapse immunologique, en couplant les signaux extracellulaires au remodelage du cytosquelette et à des voies de signalisation telles que la signalisation des intégrines « outside-in », l’activation des kinases de la famille SRC et des processus associés aux adhérences focales. L’activité d’ITGAL influence les seuils d’activation lymphocytaire, les fonctions effectrices dépendantes de l’antigène et la coordination des réponses inflammatoires. Des interactions LFA-1–ICAM dérégulées et une expression altérée d’ITGAL sont impliquées dans des pathologies à médiation immunitaire et des défauts d’adhérence des leucocytes, ce qui étaye son utilisation dans des études portant sur l’inflammation, l’auto-immunité et la dynamique du microenvironnement tumoral–immunitaire.

Integrin αL/ITGAL/CD11a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGAL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGAL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGAL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGAL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.