Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αL/ITGAL/CD11a: sc-402246-ACT

ITGAL code l’intégrine αL (CD11a), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β2 (CD18) pour former LFA-1, un récepteur d’adhérence majeur à la surface des leucocytes. LFA-1 médie l’adhérence ferme et la transmigration en se liant aux ligands de la famille ICAM, et coordonne une signalisation « outside-in » qui remodèle le cytosquelette d’actine, favorise la formation de la synapse immunologique et ajuste les seuils d’activation des lymphocytes T. L’activité d’ITGAL est régulée via la signalisation « inside-out » des intégrines en aval des récepteurs aux chimiokines et du TCR, ce qui la relie au trafic leucocytaire, à la reconnaissance de l’antigène et aux réponses inflammatoires. Un dysfonctionnement d’ITGAL/LFA-1 a été associé à des altérations de l’adhérence et de la signalisation des cellules immunitaires dans des contextes de maladies auto-immunes et inflammatoires, ainsi que dans les interactions tumeur–système immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques en immunologie.

Integrin αL/ITGAL/CD11a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGAL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αL/ITGAL/CD11a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGAL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αL/ITGAL/CD11a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGAL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αL/ITGAL/CD11a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αL/ITGAL/CD11a dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGAL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.