Plasmide Double Nickase (h) Integrin αIIb/ITGA2B/CD41: sc-400614-NIC

ITGA2B code l’intégrine αIIb (CD41), un récepteur d’adhérence enrichi dans les plaquettes et les mégacaryocytes, qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β3 (αIIbβ3) pour se lier au fibrinogène et à d’autres ligands contenant le motif RGD. Cette intégrine est un médiateur central de l’agrégation plaquettaire, du remodelage du cytosquelette et de la signalisation bidirectionnelle « outside-in/inside-out » qui coordonne l’adhérence, l’étalement et la sécrétion des granules. La signalisation αIIbβ3 s’interface avec des voies dépendantes de Src/FAK, la signalisation PI3K–AKT et des réseaux de régulation de l’actine afin de contrôler la formation du clou hémostatique et la stabilité du thrombus. Les variations génétiques ou les altérations d’expression d’ITGA2B sont associées à des troubles héréditaires de la fonction plaquettaire et sont largement étudiées dans le contexte de la dysrégulation de la thrombose et des phénotypes hémorragiques.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.