Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 (m): sc-421160

Présentation

Itga2b code l’intégrine αIIb (CD41), qui s’associe à l’intégrine β3 (CD61) pour former le récepteur plaquettaire du fibrinogène αIIbβ3, un médiateur central de l’adhésion et de l’agrégation plaquettaires. Lors de l’activation, αIIbβ3 déclenche une signalisation « inside-out » et « outside-in » qui relie des ligands de la matrice extracellulaire tels que le fibrinogène et le facteur von Willebrand au remodelage du cytosquelette, à la dynamique des adhésions focales et à des voies de signalisation dépendantes de Src/FAK. Chez la souris, l’expression d’Itga2b marque l’engagement de la lignée mégacaryocytaire et soutient la production de plaquettes ainsi que les réponses hémostatiques. Une signalisation des intégrines dérégulée et une activation plaquettaire altérée sont largement pertinentes pour l’étude de la thrombopénie, des phénotypes hémorragiques, de la thrombose associée à l’inflammation et des interactions plaquettes–immunité dans des modèles de maladies vasculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Itga2b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Itga2b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Itga2b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin αIIb/ITGA2B/CD41.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Itga2b pour l'étude de la signalisation de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Itga2b essentiels à la fonction de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Itga2b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Itga2b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 plasmide HDR (m) et le Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Itga2b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Itga2b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.