Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin αE/ITGAE/CD103 (h): sc-404333

Présentation

ITGAE code l’intégrine αE (CD103), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β7 pour former αEβ7, un récepteur d’adhérence se liant à l’E‑cadherine et favorisant la rétention des lymphocytes au sein des tissus épithéliaux. Cette intégrine contribue au trafic des cellules immunitaires, à la résidence tissulaire et à l’organisation de la synapse immunologique, en intégrant les signaux de la matrice extracellulaire et de l’adhérence cellule–cellule avec le remodelage du cytosquelette et des voies de signalisation « outside‑in » qui influencent l’état d’activation. CD103 est largement utilisé comme marqueur des lymphocytes T mémoire résidents tissulaires et de certains sous-ensembles de cellules dendritiques, et sa fonction recoupe des voies contrôlant l’immunité de barrière épithéliale et la surveillance muqueuse. Des interactions médiées par αEβ7 dérégulées ont été associées à des processus inflammatoires et auto-immuns dans les tissus barrières, ainsi qu’à la composition du microenvironnement immunitaire tumoral, faisant d’ITGAE une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’infiltration immunitaire et du dialogue épithélio‑immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin αE/ITGAE/CD103 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITGAE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITGAE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITGAE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin αE/ITGAE/CD103.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITGAE pour l'étude de la signalisation de Integrin αE/ITGAE/CD103, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ITGAE essentiels à la fonction de Integrin αE/ITGAE/CD103
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITGAE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin αE/ITGAE/CD103 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Integrin αE/ITGAE/CD103 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITGAE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin αE/ITGAE/CD103 plasmide HDR (h) et le Integrin αE/ITGAE/CD103 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITGAE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITGAE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.