Integrin α9/ITGA9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402221-ACT

ITGA9 codifica a integrina α9, uma subunidade α que heterodimeriza com a integrina β1 para formar um recetor de superfície celular que medeia a adesão a ligandos da matriz extracelular, como a tenascina-C, a osteopontina e a VCAM1. A sinalização da integrina α9β1 coordena a remodelação do citoesqueleto, a dinâmica das adesões focais e a migração celular através de vias que envolvem FAK/SRC, PI3K–AKT e as GTPases da família Rho, influenciando assim a remodelação tecidular e o tráfego de células inflamatórias. A atividade de ITGA9 tem sido associada a processos como angiogénese, reparação de feridas e desenvolvimento de válvulas linfáticas, e a expressão alterada é estudada no contexto de fibrose, inflamação crónica e invasividade de células tumorais. Como recetor associado à mecanotransdução, a integrina α9 oferece uma ferramenta útil para investigar como a composição e a rigidez da MEC moldam o comportamento celular.

Integrin α9/ITGA9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α9/ITGA9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α9/ITGA9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α9/ITGA9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α9/ITGA9 em células tumorais com expressão de ITGA9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.