Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin β6/ITGB6: sc-400999-ACT

ITGB6 code la sous-unité β6 des intégrines, qui s’associe à l’intégrine αV pour former l’hétérodimère αVβ6, lequel assure l’adhésion des cellules épithéliales à des ligands de la matrice extracellulaire (MEC) et régule la migration, la polarité et le remodelage tissulaire. αVβ6 active de manière dépendante du contexte le TGF-β latent via des interactions avec des protéines contenant le motif RGD, reliant ainsi ITGB6 à la signalisation TGF-β/SMAD, à la transition épithélio-mésenchymateuse et aux programmes de réparation des plaies. Une expression aberrante d’ITGB6 et une fonction altérée d’αVβ6 ont été associées au remodelage fibrotique ainsi qu’à l’invasion et aux métastases liées aux tumeurs dans plusieurs cancers épithéliaux, où elles peuvent moduler le microenvironnement local et la signalisation inflammatoire. En tant que récepteur de surface intégrant les signaux de la MEC à la signalisation intracellulaire, ITGB6 est fréquemment utilisé pour étudier la mécanotransduction, la communication cellule–matrice et les réponses transcriptionnelles induites par le TGF-β.

Integrin β6/ITGB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGB6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β6/ITGB6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGB6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGB6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β6/ITGB6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGB6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β6/ITGB6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β6/ITGB6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGB6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.