Plasmide Double Nickase (h) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-400380-NIC

ITGA6 code l'intégrine α6 (CD49f), une sous-unité α qui s'associe principalement à β1 ou β4 pour former des récepteurs liant la laminine et assurant l'adhésion cellule–matrice extracellulaire. Les complexes d'intégrine α6 coordonnent la signalisation liée aux adhésions focales et aux hémidesmosomes afin de réguler la polarité épithéliale, la migration et la survie via des voies incluant FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK. CD49f est largement utilisé comme marqueur associé aux progéniteurs épithéliaux et aux compartiments de type cellules souches, ce qui reflète son rôle dans le maintien de l'architecture tissulaire et des interactions avec la niche. Une expression dérégulée d'ITGA6 ou une signalisation des intégrines altérée est associée à l'invasion, à la dissémination métastatique et à des phénotypes de résistance aux traitements dans de nombreux contextes tumoraux, ainsi qu'à la biologie de la membrane basale et aux dermatoses bulleuses via des structures d'ancrage dépendantes de l'α6β4.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.