Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-400380-ACT

ITGA6 code l’intégrine α6 (CD49f), une sous-unité α qui s’associe principalement à β1 ou β4 pour former des récepteurs liant la laminine et organisant l’adhérence cellule–matrice extracellulaire. Via la signalisation des adhérences focales et les voies de l’intégrine-linked kinase (ILK), les intégrines contenant α6 régulent la dynamique du cytosquelette, la polarité cellulaire, la migration et la survie, influençant les comportements des cellules épithéliales et des cellules souches/progénitrices. ITGA6 est largement utilisé comme marqueur des compartiments épithéliaux basaux et des progéniteurs résidents des tissus, et une altération de la signalisation de l’intégrine α6 a été associée à des changements d’invasion, d’état de différenciation et d’interactions avec le microenvironnement dans de multiples contextes pathologiques. Ses rôles dans l’assemblage des hémidesmosomes et l’engagement avec la membrane basale en font une cible fréquente des études sur l’architecture tissulaire, la réparation des plaies et les phénotypes liés aux métastases.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α6/ITGA6/CD49f. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α6/ITGA6/CD49f au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α6/ITGA6/CD49f dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.