Integrin α6/ITGA6/CD49f Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400380-ACT

ITGA6 codifica a integrina α6 (CD49f), uma subunidade α que se associa principalmente às subunidades β1 ou β4 para formar recetores de ligação à laminina que organizam a adesão célula–matriz extracelular. Através da sinalização em adesões focais e de vias da quinase ligada a integrinas (integrin-linked kinase), integrinas contendo α6 regulam a dinâmica do citoesqueleto, a polaridade celular, a migração e a sobrevivência, influenciando comportamentos de células epiteliais e de células estaminais/progenitoras. O ITGA6 é amplamente utilizado como marcador de compartimentos epiteliais basais e de progenitores residentes nos tecidos, e alterações na sinalização da integrina α6 têm sido associadas a mudanças na invasão, no estado de diferenciação e nas interações com o microambiente em múltiplos contextos de doença. Os seus papéis na montagem de hemidesmossomas e no contacto com a membrana basal fazem dele um alvo frequente em estudos sobre arquitetura tecidular, reparação de feridas e fenótipos relacionados com metástases.

Integrin α6/ITGA6/CD49f O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α6/ITGA6/CD49f O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α6/ITGA6/CD49f. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α6/ITGA6/CD49f no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α6/ITGA6/CD49f em células tumorais com expressão de ITGA6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.