Particules Lentivirales d'Activation (m) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-431434-LAC

Itgb4 code pour l’intégrine β4 (ITGB4/CD104), un récepteur d’adhérence se liant à la laminine qui s’associe à l’intégrine α6 pour former α6β4, un composant structural essentiel des hémidesmosomes dans les tissus épithéliaux. Via son couplage à des adaptateurs du cytosquelette et de la signalisation, α6β4 favorise l’ancrage à la membrane basale et régule des processus tels que la polarité cellulaire, la migration et la survie, avec des liens fonctionnels avec la dynamique des adhésions focales et des programmes de signalisation associés à PI3K/AKT et aux MAPK. Une expression ou une localisation dérégulée d’ITGB4 a été associée à une altération de l’intégrité épithéliale et à un comportement invasif dans des modèles de cancer, et cette molécule est largement étudiée dans les contextes de la biologie des barrières cutanée et respiratoire, de la réparation tissulaire et des interactions épithélio–stromales.

Les particules d'activation lentivirales Integrin β4/ITGB4/CD104 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Itgb4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Integrin β4/ITGB4/CD104 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Itgb4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Integrin β4/ITGB4/CD104. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Itgb4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.