Plasmide CRISPR d'Activation (m) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-431434-ACT

Itgb4 code l’intégrine β4 (ITGB4/CD104), un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’associe principalement à l’intégrine α6 pour former l’hétérodimère α6β4, un récepteur majeur de la laminine impliqué dans l’ancrage des épithéliums à la membrane basale. Via l’assemblage des hémidesmosomes et l’interconnexion avec les adhérences focales ainsi que la signalisation des facteurs de croissance, ITGB4 contribue à coordonner la polarité cellulaire, la migration et des voies de survie, notamment les voies PI3K–AKT et MAPK. Une expression ou une signalisation altérée d’ITGB4 est associée à des modifications de l’intégrité épithéliale, du comportement invasif et du remodelage de la matrice extracellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la progression des carcinomes, de la réparation des plaies et du remodelage tissulaire inflammatoire. Dans les systèmes murins, Itgb4 est souvent utilisé pour analyser les interactions épithélio-stromales et les réseaux de signalisation dépendants de l’adhérence dans des modèles organotypiques et in vivo.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Itgb4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Itgb4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Itgb4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β4/ITGB4/CD104. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Itgb4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β4/ITGB4/CD104 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β4/ITGB4/CD104 dans les cellules tumorales présentant une expression de Itgb4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.