Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-400573-ACT

ITGB4 code l’intégrine β4 (CD104), un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’associe généralement à l’intégrine α6 pour former le dimère α6β4, un composant clé des hémidesmosomes qui ancre les cellules épithéliales à la membrane basale riche en laminine. En se couplant aux filaments intermédiaires et via des interactions avec les adhérences focales et la signalisation des facteurs de croissance, ITGB4 régule la polarité épithéliale, la migration, la survie et la mécanotransduction, avec des effets en aval sur des voies telles que PI3K–AKT, MAPK et le remodelage du cytosquelette. Une expression ou une localisation altérée d’ITGB4 est associée à une perturbation de l’adhérence cellule–matrice, à une augmentation du comportement invasif et au remodelage des barrières épithéliales dans de multiples contextes pathologiques. Parce que α6β4 intègre les signaux de la matrice extracellulaire à la signalisation intracellulaire, ce complexe est largement étudié dans la signalisation dépendante de l’adhérence, les programmes associés à la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) et les interactions avec le microenvironnement tumoral.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGB4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGB4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGB4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β4/ITGB4/CD104. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGB4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β4/ITGB4/CD104 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β4/ITGB4/CD104 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGB4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.