Plásmido Doble Nickase (m) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-421162-NIC

El gen Itga4 de ratón codifica la integrina α4 (ITGA4/CD49d), un receptor de adhesión que se asocia con β1 o β7 para formar las integrinas VLA-4 o α4β7, que regulan el tráfico leucocitario, la adhesión firme y la transmigración mediante su unión a ligandos como VCAM1 y la fibronectina. La señalización “outside-in” mediada por ITGA4 coordina la remodelación del citoesqueleto y programas de supervivencia a través de nodos de señalización de adhesiones focales, incluidos FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK, vinculando la interacción con la matriz extracelular con la expresión génica y la motilidad. En inmunología y biología vascular, las integrinas α4 influyen en el reclutamiento de células inflamatorias, el homing de células hematopoyéticas y la extravasación específica de tejido, procesos que se investigan con frecuencia en modelos de autoinmunidad, neuroinflamación e infiltración leucocitaria asociada a tumores. La actividad desregulada de ITGA4 también se estudia en contextos de inflamación crónica y formación de nichos metastásicos, donde las dinámicas de adhesión alteradas moldean la localización celular y el diálogo con el microambiente.

Integrin α4/ITGA4/CD49d El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Itga4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Itga4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Itga4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Itga4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.