Plasmide Double Nickase (h) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-401336-NIC

ITGA4 code l’intégrine α4 (CD49d), un récepteur d’adhésion qui s’associe à β1 ou β7 pour former les hétérodimères α4β1 et α4β7, lesquels régulent le trafic des leucocytes, l’adhérence ferme et la migration transendothéliale. En se liant à des ligands tels que VCAM1 et la fibronectine, l’intégrine α4 coordonne une signalisation « outside-in » qui s’articule avec le remodelage du cytosquelette et des voies de survie, notamment les voies des adhésions focales, PI3K–AKT et MAPK. L’activité d’ITGA4 contribue au positionnement des cellules immunitaires dans les tissus et influence les microenvironnements inflammatoires en modulant les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Une adhésion et une migration dépendantes de l’intégrine α4 dérégulées ont été impliquées dans des affections inflammatoires chroniques et dans la biologie des hémopathies malignes, ce qui en fait une cible d’intérêt pour les études sur les interactions immunitaires et tumeur–stroma.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.