Plasmide Double Nickase (h) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-400216-NIC

ITGB3 code l'intégrine β3 (CD61), un récepteur d'adhésion transmembranaire qui forme des hétérodimères avec l'intégrine αIIb ou αV pour constituer les complexes αIIbβ3 et αVβ3, lesquels se lient à des ligands de la matrice extracellulaire et transmettent une signalisation bidirectionnelle à travers la membrane plasmique. En s'associant à des régulateurs des adhésions focales et du cytosquelette, l'intégrine β3 module l'adhérence, l'étalement, la migration et la mécanotransduction cellulaires, en mobilisant des voies telles que FAK/SRC, PI3K–AKT et les GTPases de la famille Rho. Dans les plaquettes et les mégacaryocytes, la signalisation de αIIbβ3 est centrale pour l'agrégation et la formation de thrombus, tandis que αVβ3 contribue aux interactions des cellules endothéliales et tumorales avec la matrice. Une expression ou une fonction altérée d'ITGB3 a été associée à des perturbations de l'hémostase, de la biologie vasculaire, de l'inflammation, ainsi qu'à l'invasion et aux métastases liées au cancer, ce qui en fait une cible largement étudiée au sein des réseaux de signalisation dépendants de l'adhésion.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.