Plasmide CRISPR d'Activation (m) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-421175-ACT

Itgb3 code l’intégrine β3 (ITGB3/CD61), une sous-unité β qui s’associe à αIIb ou à αV pour former des récepteurs intégrines assurant l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice. Par la liaison aux ligands et une signalisation bidirectionnelle, l’intégrine β3 régule l’assemblage des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette d’actine, la migration et des voies de survie incluant les voies FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK. Dans les modèles murins, Itgb3 est largement étudié dans la biologie des plaquettes et des mégacaryocytes, l’angiogenèse, la fonction des ostéoclastes et le trafic des cellules inflammatoires, et sa dérégulation est associée à des phénotypes liés à la thrombose, au remodelage vasculaire et aux interactions tumeur–stroma. Ces rôles font d’ITGB3 un nœud pertinent pour étudier la signalisation dépendante de l’adhésion et la mécanotransduction dans des modèles de développement et de maladies.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Itgb3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Itgb3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Itgb3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β3/ITGB3/CD61. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Itgb3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β3/ITGB3/CD61 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β3/ITGB3/CD61 dans les cellules tumorales présentant une expression de Itgb3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.