Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-400216-ACT

ITGB3 code l’intégrine β3 (CD61), un récepteur d’adhésion transmembranaire qui forme un hétérodimère avec αIIb (formant αIIbβ3) ou avec αV (formant αVβ3) pour médier la liaison à des ligands de la matrice extracellulaire tels que le fibrinogène, la vitronectine et la fibronectine. Via l’assemblage des adhérences focales et la signalisation outside-in/inside-out, l’intégrine β3 coordonne l’adhésion cellulaire, l’agrégation plaquettaire, le remodelage du cytosquelette et la migration, par des voies incluant FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK. L’activité d’ITGB3 est centrale pour la fonction plaquettaire et la formation de thrombus, et contribue aussi aux interactions des cellules endothéliales et tumorales avec le microenvironnement. Une signalisation dérégulée de l’intégrine β3 a été associée à des altérations de l’hémostase, de l’inflammation et à des processus favorisant l’angiogenèse et la métastase dans de multiples contextes pathologiques.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGB3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGB3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β3/ITGB3/CD61. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGB3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β3/ITGB3/CD61 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β3/ITGB3/CD61 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGB3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.