Plasmide Double Nickase (h) Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-400841-NIC

ITGA3 code l’intégrine α3 (CD49c), qui forme principalement un hétérodimère avec l’intégrine β1 pour constituer un récepteur de la laminine reliant la matrice extracellulaire au cytosquelette d’actine. Ce complexe d’adhérence régule la dynamique des adhérences focales, la polarité cellulaire et la signalisation « outside-in » via des voies telles que FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, influençant ainsi la migration, la survie et les interactions épithélio-mésenchymateuses. L’intégrine α3 est importante pour l’organisation de la membrane basale et l’intégrité des tissus épithéliaux, et une activité altérée d’ITGA3 a été associée à un comportement cellulaire invasif, à un remodelage lié à la fibrose et à une dérégulation des programmes de réparation des plaies. En recherche biomédicale, ITGA3 est couramment étudié pour analyser la communication cellule–matrice, la mécanotransduction ainsi que le trafic et la morphogenèse dépendants de la laminine dans des modèles épithéliaux et de microenvironnement tumoral.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.